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第127章 结局二(第3页)

1.材料的制备

健壮枝梢去除叶片分成1-50px自来水冲洗消毒75%的酒精30秒0.1%升汞或20倍次氯酸钠消毒8-10min无菌水修剪剥离茎尖,通常切割下顶端0.2-0.5mm叶原基的茎尖(无菌水)接种。

2.培养基

多为MS培养基及其改良配方,还有White、B5等。

3.培养条件

(1)温度:26℃-28℃

(2)光照:光培养的效果通常比暗培养好。

(3)湿度:与其他器官培养相似。

分生组织之所以能避开病毒侵染,可能有4方面原因:

1、在植物体中,病毒的移动主要靠两条途径,一是通过维管系统,而分生组织中尚未形成维管系统;二是通过胞间连丝,但这条途径病毒移动速度非常缓慢,难以追赶上活跃生长的茎尖和根尖。

2、在旺盛分裂的分生组织中,代谢活动很高,使病毒无法进行复制。

3、在茎尖中存在高水平内源激素,可以抑制病毒的增殖。

4、在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”,它在分生组织中的活性应最高,因而使分生组织不受侵染。

以上是四种可能原因,无论哪种说法正确,事实是分生组织一般不带病毒。因此,利用这一原理,进行茎尖培养,培育无病毒苗。

(二)茎尖培养脱毒

1.茎尖培养脱毒的原理

(1)病毒在植物体内的分布

病毒浓度不同,离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖离体培养便可获得无病毒再生植株。

必须指出的是,所谓无病毒,只是相对的,不是绝对的。

(2)茎尖大小与脱毒

茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要,生长素,细胞分裂素,因而带叶原基的茎尖生长快,成苗率高。因此茎尖越大培养成活率越高。因此对不同植物脱毒适宜的茎尖大小不同

茎尖培养脱毒的方法

(1)取样与消毒

可直接选定的植株上取顶芽与侧芽进行消毒接种。

消毒方法是:剪取顶芽梢段3、5厘米,剥去大叶片,用自来水冲洗干净,在75%酒精中浸泡30秒左右,用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分,最后用无菌水冲洗材料4-5次。

(2)接种

材料置10~40倍的双筒解剖镜下,解剖刀切取0.1~0.3mm带有1~2个叶原基的茎尖,接种到培养基上。

(3)培养

接种后材料置25+2℃,光照度1500-5000LX,每日光照10-16h条件下培养。但一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中6-BA的浓度可形成大量从生芽。

3.培养基与培养方式:

(1)培养基:常用MS,White等培养基。

(2)培养方式:茎尖培养一般采用半固体培养基

全剧终!

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